Применение CAPS-анализа ISSR-маркеров при типировании сортов голубики высокой

Abstract

Во введении указан объект исследования – голубика высокая (Vaccinium corymbosum) и перспективы развития голубиководства в Беларуси, а также возможности применения к данному виду рестрикционного анализа амплифицированных фрагментов ДНК (CAPS). Целью исследования является выявление полиморфизма в избранных мономорфных (повторно амплифицированных) ISSR-фрагментах шести сортов с помощью CAPS-анализа. В основной части описаны: метод выделения ДНК из молодых стеблей голубики, методика получения изолированных ISSR-фрагментов элюцией из геля, условия проведения ISSR-ПЦР и CAPS-анализа. Перечислены эндонуклеазы, которыми обрабатывали данные фрагменты, полученные при помощи праймеров UBC 808, 818, 824 и 845. Приведены основные сведения о частотах ISSR-маркеров в изученной выборке сортов голубики. Описано применение CAPS-метода для изучения полиморфизма 10 ISSR-участков генома по наличию сайтов рестрикции. Даны результаты расщепления трех ISSR-фрагментов, элюированных из агарозных гелей, двумя эндонуклеазами рестрикции, характеризующимися повышенной частотой расщепления геномной ДНК. Получены три качественных CAPS-маркера у трех сортов голубики (Reka, Northblue и Bluejay), отличающие их от остальных изученных сортов. Отмечено, что внутри фрагмента небольшой длины (до 300 п.н.) CAPS-маркеры, вероятно, из-за малого размера трудновыявляемы. Представлены электрофореграммы мономорфных фрагментов шести сортов голубики после обработки эндонуклеазами. Проведена дополнительная оценка степени генетического сходства сорта Reka и Bluejay. Выдвинуты предположения о возможности HinP1I разрезать метелированные основания. Полученные результаты могут быть применены как дополнение при молекулярной идентификации и сертификации сортов Vaccinium corymbosumи для филогенетических исследований.