Сравнительный анализ методов экстракции общей геномной ДНК голубики высокорослой

Abstract

Апробированы два протокола экстракции ДНК для растительных тканей с повышенным содержанием ингибиторов ПЦР (Li et al., 2007, с модификациями; Dempster et al., 1999, с модификациями) применительно к листьям и стеблям Vaccinium corymbosum. Оба протокола основаны на термическом лизисе тканей с использованием ЦТАБ, ЭДТА, NaCl, меркаптоэтанола, ПВП. В первом протоколе применяется экстракция фенолом, хлороформом и изоамиловым спиртом и осаждение ДНК этанолом. Во втором применяется экстракция хлороформом и изоамиловым спиртом и осаждение ДНК изопропанолом. Второй протокол позволил получить ДНК высокой степени очистки, дающей достаточный продукт при ISSR–ПЦР.

Two protocols of DNA extraction from Vaccinium corymbosumleaves and stems (according to Li et al., 2007, with modifications; according to Dempster et al., 1999, with modifications) were tested. Both protocols were designed for application to the tissues with high contents of PCR inhibitors and based on thermal lysis in buffer containing CTAB, EDTA, NaCl, 2–mercaptoethanol and PVP. The first protocol includes extraction by phenol, chloroform and isoamyl alcohol, and DNA precipitation by ethanol. The second includes extraction by chloroform and isoamyl alcohol, and DNA precipitation by isopropanol. DNA extracts obtained by the second protocol were ofhigh purity and provided enough products in ISSR–PCR.