Подбор условий проведения ISSR– пцр для сортовой голубики высокорослой (Vaccinium corymbosum)

Abstract

Экспериментально оценивалось влияние трех переменных факторов в составе ПЦР–смеси при ISSR–маркировании растений с праймером UBC 818: молярной концентрации MgCI2, молярной концентрации дНТФ и массовой концентрации ДНК–матрицы. Установлены следующие оптимальные значения, дающие как достаточное число различных ISSR–aрагментов, так и достаточное количество копий каждого фрагмента, при общем реакционном объеме 25 мкл: 2‒2.5 мМ MgCI2, 125 мкМ смеси дНТФ (1 : 1 : 1 : 1), 10‒20 нг ДНК. Ключевые слова: Vaccinium сorymbosum L., ISSR-ПЦР, сорта, MgCI2, дНТФ, ДНК, ПЦР-продукт.

In the experiments, the effect of three variable factors in PCR mixture was assessed: concentration of MgCI2, concentration of dNTP, and the amount of DNA template. The mixture was used for ISSR profiling of plants with primer UBC 818. The optimum parameters of PCR mixture were stated taking into account the higher number of ISSR fragments and sufficient amount of copies of each fragment. These parameters were (per 25 μl of mixture): 2‒2.5 mM MgCI2, 125 μМ dNTP mix (1 : 1 : 1 : 1), 10‒20 ng of DNA template. Key words: Vaccinium сorymbosum L., ISSR-PCR, cultivars, MgCI2, dNTP, DNA, PCR- product.